اسمها الحقيقي جنيفر اناستاساكيس، ولدت في 11 فبراير/ شباط 1969 في منطقة شيرمان أوكس بكاليفورنيا. ابنة الممثلين نانسي وجون انيستون، ولأنها من سلالة اغريقية فقد قضت عاما واحدا من أعوام طفولتها في اليونان، بعدها عادت عائلتها الى الولايات المتحدة لتستقر في نيويورك وليحصل والدها على دور الشرير فيكتور كيرياكيس في مسلسل قناة NBC (Days of our Lives).

انفصل والداها في العام 1980 فبقيت جنيفير في البداية مع والدتها، وبعد عامين التحقت بمدرسة ردولف ستينر لتنضم الى نادي التمثيل في المدرسة. ثم واصلت دراسات التمثيل في اشهر مدرسة لتعلم فن التمثيل بنيويورك إذ درست فن المسرح والفنون الجميلة. وعلى رغم انها كانت رسامة ذات موهبة كبيرة فإن جنيفر احترفت التمثيل.

بعد تخرجها في العام 1987، ظهرت انيستون في عدد من الإعلانات التلفزيونية وبعض المسرحيات مثل For Dear Life . وخلال هذا الوقت كانت هذه الممثلة المكافحة ترفع دخلها بالعمل نادلة في المطاعم. وفي محاولة منها لايجاد عمل ذي عائد مادي أكبر انتقلت الى لوس انجليس إذ قدمت أول أدوارها التلفزيونية في مسلسل Molloy الكوميدي الذي عرض في العام 1990 ولم يستمر عرضه طويلا. وفي بداية التسعينات قدمت عددا من الأدوار الثانوية في مسلسلات تلفزيونية غير ناجحة مثل:Ferris Bueller (1990) كما ظهرت في فيلم الرعب السينمائي Leprechaun (1993) الذي لم يلقَ استحسان المشاهدين.

وبسبب اصرارها على النجاح، خاضت الممثلة تجربة مسلسل تلفزيوني آخر هو مسلسل Friends (1994) الذي يتحدث عن مجموعة تتكون من 20 شخصا أو ما يزيد بقليل من أهالي نيويورك. ولاندهاش المنتجين بأدائها فقد أسند إليها دور أميرة تعيش في الضاحية تتحول الى نادلة في مطعم تدعى راشيل غرين. وحين عُرض المسلسل للمرة الأولى حصل على استحسان النقاد والمشاهدين، وأصبح اسم جنيفر والممثلين المشاركين معها أسماء مألوفة لدى الجميع.

ومنذ ذلك الحين حاولت انيستون ان تستفيد من نجوميتها التلفزيونية لتنجح على الشاشة الكبيرة. ظهرت في عدة أفلام خفيفة، مثل الفيلم الكوميدي الرومانسي الذي لقي استحسانا كبيرا She's the one (1996).

في العام 1999 قدمت انيستون صوت آني هيو في مسلسل الخيال الكارتوني .The Iron Giant بعدها انضمت الى طاقم تمثيل متميزين، منهم سوزان ساراندون، وسالي فيلد، وانجليكا هيستون، في مسلسل Time of Our Lives الذي قدم في العام 2000.

في سبتمبر/ أيلول 2001 قدمت دور مديرة أعمال المغني مارك والبيرغ وصديقته في فيلم Rock Star. وبعد عام من ذلك كسبت استحسان النقاد عن فيلم The Good Girlالذي لعبت فيه دور بائعة في أحد المخازن مكتئبة تبحث عن حياة ذات معنى أكبر، وفي العام 2003 نحت منحى أكثر بهجة وذلك حين لعبت دور زوجة (كيم كاري) وهو رجل يملك قوى شبيهة بقوة الله في فيلم Bruce Almighty . كما وقعت على بطولة وانتاج فيلم كوميديا سوداء يدور حول زوجة سياسي تدخل في صراع مع ابنها البالغ من العمر عشر سنوات الذي تخلت عنه بالتبني.

في نهايات العام 1998 التقت الممثل براد بيت وتزوجته في 29 يوليو/ تموز 2000 في ماليبو بكاليفورنيا